Desialización eritrocitaria con y sin exposición del antígeno T producida por Trichinella spiralis / Erythrocyte desialylation with and without T antigen exposure produced by Trichinella spiralis / Desialylation eritrocitaria com e sem exposição antigénio T produzida por Trichinella spiralis

El objetivo del trabajo fue estudiar la desialización de eritrocitos que desenmascaran el antígeno T y de los glóbulos que no lo exponen, por contacto con larvas recién nacidas (LRN) de T. spiralis. Se trabajó con 15 suspensiones eritrocitarias en medio enzimático, incubadas con LRN. Los GR control se incubaron con solución salina. Para analizar el efecto del parásito sobre la exposición del antígeno T, se aplicó el Método de Aglutinación anti-T con antígeno T y se estudió la agregación por los métodos de Polibrene y de Análisis Digital de Imágenes, determinando CexpST, CCA y Distribución de los agregados eritrocitarios (DAE). La media de los coeficientes en los eritrocitos que expusieron el antígeno T fueron CexpST=0,22±0,179 y coeficiente de células aisladas (CCA)=0,73±0,108 y en los que no 0,86±0,125 y 0,205±0,163 respectivamente. La DAE mostró que los GR que lo expusieron, presentaron marcada disminución de células aisladas y pronunciado aumento de grandes agregados en relación a los controles, mientras que los GR en los que no hubo exposición, la disminución de células aisladas con respecto a los controles fue menor y el aumento de agregados estuvo homogéneamente distribuido entre todas las categorías. La experiencia realizada concluye que los valores obtenidos de los coeficientes difieren significativamente en los GR que exponen el antígeno T y en los que no, por lo que estas técnicas podrían ser predictivas para detectar desenmascaramiento T.

The aim of this work was to study the desialylation of erythrocytes that expose the T antigen by contact with T. spiralis newborn larvae (NL) and of those that do not. Work was carried out with 15 red cell suspensions in enzymatic medium, which were incubated with NL. The respective Control RBC were incubated with saline solution. To analyze the effect of the parasite on the exposure of the T antigen, the Anti T- antigen T Agglutination Method was applied and the aggregation was studied by Polybrene and Digital Image Analysis Methods determining CexpTS, ICC and Distribution of Erythrocyte Aggregates (DEA). The mean of coefficients in the erythrocytes that exposed the T antigen were CexpTS= 0.22 ± 0.179 and ICC= 0.73 ± 0.108 and of those that did not it was 0.86±0.125 y 0.205±0,163 respectively. DEA showed that the RBCs that exposed it showed a marked decrease of isolated cells and a pronounced increase of large aggregates in relation to the Controls, while the RBCs in which there was no exposure, the decrease of isolated cells with respect to Controls was lower and the increase of aggregates was homogeneously distributed among all categories. The experience concludes that the obtained values of the coefficients differ significantly in the RBCs that expose the T antigen from those that do not, so these techniques could be predictive to detect T unmasking.

O objetivo do trabalho foi estudar a desialização de eritrócitos que desmarcaram o antígeno T e dos glóbulos que não o expõem, por contato com LRN de T. spiralis. Trabalhou-se com 15 suspensões de eritrócitos em meio enzimático, incubadas com LRN. Os GV controle foram incubados com solução salina. Para analisar o efeito do parasita sobre a exposição do antígeno T, foi aplicado o Método de Aglutinação anti T com antígeno T e se estudou a agregação pelos Métodos de Polibrene e de Análise Digital de Imagens, determinando CexpST, CCA e Distribuição dos agregados eritrocitários (DAE). A média dos coeficientes nos eritrócitos que expuseram o antígeno T foram CexpST= 0.22±0.179 e CCA= 0.73±0.108 e naqueles que não o expuseram 0.86±0.125 y 0.205±0,163 respectivamente. Foi demonstrado que os GV que o expuseram, apresentaram marcada diminuição de células isoladas e pronunciado aumento de grandes agregados em relação aos controles, enquanto que os GV nos quais não houve exposição, a diminuição de células isoladas com respeito aos controles foi menor e o aumento de agregados esteve homogeneamente distribuído entre todas as categorias. A experiência realizada conclui que os valores obtidos dos coeficientes diferem significativamente nos GV que expõem o antígeno T e nos que não, portanto estas técnicas poderiam ser preditivas para detectar desmascaramento T.

Assessing endocrine and immune parameters in human immunodeficiency virus-infected patients before and after the immune reconstitution inflammatory syndrome

ABSTRACT Objective The present study compares immune and endocrine parameters between HIV-infected patients who underwent the Immune Reconstitution Inflammatory Syndrome (IRIS-P) during antiretroviral therapy (ART) and HIV-patients who did not undergo the syndrome (non-IRIS-P). Materials and methods Blood samples were obtained from 31 HIV-infected patients (15 IRIS-P and 16 non-IRIS-P) before ART (BT) and 48 ± 2 weeks after treatment initiation (AT). Plasma Interleukin-6 (IL-6) and Interleukin-18 (IL-18) were determined by ELISA. Cortisol, dehydroepiandrosterone sulfate (DHEA-S) and thyroxin concentrations were measured using chemiluminescence immune methods. Results Concentrations of IL-6 (7.9 ± 1.9 pg/mL) and IL-18 (951.5 ± 233.0 pg/mL) were significantly higher (p < 0.05) in IRIS-P than in non-IRIS-P (3.9 ± 1.0 pg/mL and 461.0 ± 84.4 pg/mL, respectively) BT. Mean T4 plasma level significantly decreased in both groups of patients after treatment (p < 0.05). In both groups cortisol levels were similar before and after ART (p > 0.05). Levels of DHEA-S in IRIS-P decreased AT (1080.5 ± 124.2 vs. 782.5 ± 123.8 ng/mL, p < 0.05) and they were significantly lower than in non-IRIS-P (782.5 ± 123.8 vs. 1203.7 ± 144.0 ng/mL, p < 0.05). IRIS-P showed higher values of IL-6 and IL-18 BT and lower levels of DHEA-S AT than in non-IRIS-P. Conclusion These parameters could contribute to differentiate IRIS-P from non-IRIS-P. The significant decrease in DHEA-S levels in IRIS-P after ART might suggest a different adrenal response in these patients, which may reflect the severity of the disease.

Estudio de la desialización producida por larvas musculares de Trichinella spiralis / Desialylation study produced by muscle larvae of Trichinella spiralis

Trichinella spiralis es agente causal de una zoonosis endémica en Argentina. El objetivo fue estudiar la desialización eritrocitaria producida por larvas musculares (LM) de T. spiralis. Se trabajó con concentrados de LM, incubados en partes iguales con glóbulos rojos (GR) Grupo O (37 °C) durante 3 horas (con y sin agitación controlada) durante 150 minutos, a intervalos de 30 minutos, para estudiar el curso de la desialización en el tiempo. Los GR controles fueron incubados de la misma manera, con igual volumen de solución fisiológica. Se aplicó el método de titulación de la agregación, calculando título y coeficiente de puntuación total (CexpST). Se encontró que los eritrocitos incubados con LM presentaron mayor agregación que los controles. El valor medio de CexpST con agitación (0,43) fue significativamente menor que cuando los GR no se agitaron (0,72). El estudio de la desialización eritrocitaria en el tiempo mostró que el título de los GR control disminuyó significativamente a los 90 minutos en 5/10 repeticiones y a los 150 minutos en 9/10. El aumento del tiempo de incubación produjo el incremento de la desialización excepto a los 120 y 150 minutos donde no existieron diferencias significativas en el valor de CexpST. La experiencia realizada in vitro, sugeriría que en la infección in vivo, las LM podrían captar el ácido siálico a partir de los residuos sializados presentes en la célula muscular.

Trichinella spiralis is the cause of an endemic zoonosis in Argentina. The objective was to study the erythrocyte desialylation by T. spiralis muscle larvae (ML) applying an aggregation titulation method. We worked with ML concentrates, which were incubated with an equal volume of O Group erythrocytes (RBCs) at 37° C for 3 hours, (with and without controlled agitation) and for 150 minutes, taking samples at 30 minutes intervals to study the course in time of the desialylation. RBCs control were incubated with an equal volume of physiological saline solution. Aggregation titulation method was applied and the title and total score coefficient (TSexpC) were calculated. The results showed that erythrocytes incubated with ML showed more aggregation than controls. The average TSexpC with agitation (0.43) was significantly lower than when erythrocytes were not stirred (0.72). The course in time of the erythrocyte desialylation showed that the RBCs contol title decreased significantly at 90 minutes in 5/10 repetitions and at 150 minutes in 9/10. Increasing the incubation time produced an increase in erythrocyte desialylation, except at the 120 and 150 minutes interval where no significant differences in TSexpC values were found. The in vitro experience would suggest that in cases of in vivo infection, ML could capture sialic acid from sialylate residues present in the muscle cell.

Alteración de la agregación eritrocitaria por larvas recién nacidas de Trichinella spiralis / Alteration of the erythrocyte aggregation by newborn larvae of Trichinella spiralis / Alteração do agregação eritrocitária por larvas recém-nascidas da Trichinella spiralis

El objetivo del trabajo fue estudiar las alteraciones en la agregación eritrocitaria producidas por recién nacidas (LRN) de T. spiralis. Se usaron concentrados de larvas LRN incubados en partes iguales con glóbulos rojos (GR) Grupo O (GR Tratados) durante 2 horas, con y sin agitación controlada, tomando muestras al tiempo inicial, 60 y 120 minutos. Los Controles fueron incubados con igual volumen de solución salina. Se aplicó Análisis Digital de Imágenes para estudiar la distribución de los agregados eritrocitarios y calcular el valor de coeficiente de células aisladas (CCA) y la Técnica de Titulación de la Agregación para determinar el Título y el CexpST. Se utilizó ANOVA bifactorial para analizar el efecto de la agitación y del tiempo de incubación en los valores de CCA. Los resultados mostraron que el aumento del tiempo de tratamiento produjo la disminución de las células aisladas y los pequeños rouleaux, y el aumento de los agregados formados por 5 o más glóbulos, lo cual incrementó significativamente el valor de CCA. El análisis estadístico determinó que la agregación de los GR Tratados a los 60 minutos fue mayor que al tiempo 0, y a los 120 minutos mayor que a los otros dos tiempos. La Titulación de la agregación mostró la disminución del CexpST y del Título de los GR Tratados. Las metodologías empleadas no mostraron diferencias significativas en tratamientos con y sin agitación. Se concluye que la disminución de carga eritrocitaria producida por LRN podría provocar alteraciones hemorreológicas en el hospedador.

The aim of this paper was to study the alterations in the erythrocyte aggregation produced by newborn larvae (NL) of T. spiralis. Work was performed with NL concentrates, which were incubated with an equal volume of O Group RBC (Treated RBC) for 2 hours, with and without controlled agitation, taking samples at the initial time, at 60 and 120 minutes. RBC Controls were incubated with equal volume of saline solution. Digital Image Analysis was applied to study the distribution of erythrocyte aggregates and to calculate ICC values, and the Aggregation Titration Technique was used to determine the Title and TSexpC. Two-factor ANOVA was used to analyze the effect of agitation and incubation time on the ICC values. The results showed that at higher treatment time, there was a decrease of isolated cells and small rouleaux and an increase of the aggregates formed by 5 or more cells, with a significant increase of ICC values. Statistical analysis determined that Treated RBC aggregation at 60 minutes was higher than at initial time and that at 120 minutes it was higher than the other two times. Aggregation Titration showed a decrease in the Treated RBC Title and TSexpC. The methodologies employed showed no significant differences in treatments with and without agitation. It is concluded that the decrease in erythrocyte charge produced by NL could cause hemorrheologic alterations in the host.

O objetivo foi estudar as alterações na agregação de eritrócitos produzidas por larvas recém-nascidas (LRN) da T. spiralis. O trabalho foi feito com concentrados de LRN incubados em partes iguais com glóbulos vermelhos (GV) Grupo O (GV Tratados), durante 2 horas, com e sem agitação controlada, levando as amostras ao tempo inicial, 60 e 120 minutos. Os controles foram incubados com igual volume de solução salina. Análise Digital de Imagens foi aplicada para estudar a distribuição dos agregados de eritrócitos e calcular o valor do Quoficiente de Células Isoladas (QCI) e a Técnica de Titulação da Agregação para determinar o Título e CexpST. Para analisar o efeito da agitação e do tempo de incubação sobre os valores do QCI foi utilizada ANOVA bifatorial. Os resultados mostraram que o aumento do tempo de tratamento produziu a diminuição das células isoladas e os pequenos rouleaux, e o aumento dos agregados formados por 5 ou mais glóbulos, aumentando o valor de QCI significativamente. A análise estatística determinou que a agregação de GV Tratados aos 60 minutos foi maior que no tempo inicial e, aos 120 minutos era maior que durante os outros dois tempos. A Titulação da Agregação mostrou a diminuição do CexpST e do Título de GV Tratados. As metodologias usadas não mostraram diferenças significantes em tratamentos com e sem agitação. Conclui-se que a diminuição de carga de eritrócitos produzida por LRN poderia resultar em alterações hemorreológicas no hospedeiro.

Estudio del efecto de Trichinella spiralis sobre la desialización aplicando el Método de Polibrene / Study of Trichinella spiralis effect on desialylation by Polybrene Method / Estudo do efeito de Trichinella spiralis em desialylation aplicando o Método de Polibreno

Experiencias previas comunicaron que los eritrocitos (GR) incubados con larvas recién nacidas (LRN) y larvas musculares (LM) de T. spiralis presentan menor contenido de ácido siálico que los correspondientes GR Controles. El objetivo del trabajo fue estudiar el efecto de LRN y LM sobre la desialización aplicando el Método de Polibrene. Se trabajó con concentrados de LRN y LM incubados en partes iguales con GR Grupo O, en medio salino y enzimático, durante 120 min a intervalos de 30 min. Los Controles fueron incubados con igual volumen de solución salina. Se aplicó el Método de Polibrene y se calculó el valor del coeficiente CexpCASP. Para analizar el efecto del parásito, medio de incubación y tiempo de tratamiento en los valores de CexpCASP, se utilizó un ANOVA multifactorial. Los resultados mostraron que el medio enzimático y el aumento del tiempo de incubación producen la mayor disminución de carga globular, reflejada en menores valores de CexpCASP, sin diferencias significativas con el estadio larval utilizado. La experiencia sugeriría que durante su migración por el torrente circulatorio las LRN podrían captar ácido siálico eritrocitario y alterar el comportamiento hemorreológico, así como también permitiría especular que ambos estadios larvales podrían secuestrarlo de células del hospedador para interferir y/o evadir su respuesta inmune...

Estudio de la cinética de captación de ácido siálico por larvas musculares de Trichinella spiralis / Study of kinetics of sialic acid capture by muscle larvae of Trichinella spiralis / Estudo da cinética de captaçao de ácido siálico por larvas musculares da Trichinella spiralis

Se ha comunicado que los eritrocitos (GR) incubados con larvas infectantes de Trichinella spiralis presentan mayor agregación que los GR Controles incubados con solución salina, lo cual indica que el parásito capta el ácido siálico globular. El objetivo fue estudiar la cinética de captación de ácido siálico por larvas musculares de T. spiralis aplicando Análisis Digital de Imágenes. Se trabajó con concentrados larvales de T. spiralis incubados en partes iguales con GR Grupo O, en medio salino y enzimático (GR Tratados), durante 120 minutos a intervalos de 15 minutos. Los Controles fueron incubados con igual volumen de solución salina. Se aplicó Análisis Digital de Imágenes y se calculó el valor del Coeficiente de células aisladas (CCA). Para analizar el efecto del tiempo de incubación en los valores de CCA, se utilizó un análisis de la variancia para un diseño en bloques completos aleatorizados. Los resultados mostraron que el valor promedio de CCA, en ambos medios, varió significativamente con el tiempo de incubación, lo que evidencia que el aumento del contacto de las larvas con los GR produce una disminución del ácido siálico que se refleja en mayores valores de CCA. La experiencia realizada sugeriría que durante su permanencia y viabilidad en el quiste, las larvas de T. spiralis podrían ir captando ácido siálico de la célula muscular con el objeto de interferiry /o evadir la respuesta inmune del hospedador...

Estudio taxonómico de aislamientos clínicos de Trichophyton en Rosario, Argentina / Taxonomic study of clinical isolates of Trichophyton in Rosario, Argentina

Debido al pleomorfismo y la variabilidad cultural que presentan las especies del género Trichophyton, los métodos de identificación basados exclusivamente en caracteres morfológicos a menudo no son suficientes para su clasificación. El objetivo de este estudio fue probar un conjunto de métodos fenotípicos para identificar aislamientos fúngicos pertenecientes al género Trichophyton empleando una técnica de taxonomía molecular como método de referencia. Se utilizaron 56 aislamientos clínicos y 6 cepas de referencia, con los que se realizaron estudios macro y micromorfológicos, así como las siguientes pruebas bioquímicas y fisiológicas: perforación del pelo in vitro, requerimientos nutricionales en medios agar Trichophyton, producción de ureasa y crecimiento en el medio agar púrpura de bromocresol-leche-glucosa (APBC-L-G). A su vez se realizó una PCR fingerprinting utilizando el cebador simple (GACA)4. Como resultado de la reacción de PCR se observaron perfiles específicos bien diferenciables para Microsporum canis, Epidermophyton fl occosum, Trichophyton rubrum y Trichophyton interdigitale, pero un mismo perfil para Arthroderma benhamiae y Trichophyton erinacei. Del total de los aislamientos clínicos evaluados, 39 coincidieron con el perfil de T. rubrum, 13 con el de A. benhamiae y 4 con el de T. interdigitale. El ensayo fenotípico más útil para diferenciar T. rubrum del complejo T. mentagrophytes fue la alcalinización del medio APBC-L-G. Con las pruebas fenotípicas se pudo diferenciar T. rubrum de los aislamientos del complejo T. mentagrophytes, pero no las especies pertenecientes a dicho complejo. La técnica molecular permitió caracterizar tanto los aislamientos de T. rubrum como los pertenecientes al complejo T. mentagrophytes, que en nuestro estudio correspondieron a T. interdigitale y Trichophyton sp. anamorfo de A. benhamiae.

Due to the pleomorphism and cultural variability displayed by species of the genus Trichophyton, the identification methods based solely on morphological features are usually insufficient for their classification. The goal of the present work was to test a set of phenotypic methods in order to identify fungal isolates that belong to the aforementioned genus. These methods were based on a molecular taxonomic technique used as standard. Clinical isolates (56) were used as samples along with 6 reference strains. Macro and micromorphological studies were performed as well as biochemical and physiological tests such as in vitro hair perforation, nutritional requirements in Trichophyton agar media, urease production and growth on bromocresol purple-milk solids-glucose (BCP-MS-G) agar. Additionally, PCR fingerprinting using the (GACA)4 primer was employed. As a result of the PCR method, specific profiles were observed for Microsporum canis, Epidermophyton floccosum, Trichophyton rubrum and Trichophyton interdigitale. Identical profiles were obtained for Arthroderma benhamiae y Trichophyton erinacei. Of the total number of clinical isolates, 39 matched the T. rubrum profile while 13 corresponded to A. benhamiae and 4 to T. interdigitale. The most useful phenotypic test to differentiate between T. rubrum and T. mentagrophytes complex strains was alkalinization of the BCP-MS-G medium. Phenotypic tests did not allow differentiation among the T. mentagrophytes complex species. On the other hand, the molecular technique allowed characterization of T. rubrum isolates as well as of those observed in our study and included in the T. mentagrophytes complex: T. interdigitale and Trichophyton sp. , the anamorph of A. benhamiae.

Acción de Ascaris lumbricoides sobre la carga aniónica de eritrocitos y eritrocitos desializados / Ascaris lumbricoides action on the erythrocyte and desyalated erythrocyte anionic charge / Ação de Ascaris lumbricoides sobre a carga aniônica de eritrócitos e eritrócitos desializados

El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto de A. lumbricoides sobre la carga aniónica de eritrocitos y eritrocitos desializados. Se trabajó con 30 extractos ([EA]) y 2 concentrados larvales parasitarios ([CLAL] 1: 500- 600/ [CLAL]2: 200- 300 larvas/ mL) y eritrocitos Grupo "O" en medio salino (GR) y enzimático (GRb). Se incubó el sedimento globular con igual volumen de parásito y el Control (GRc) con solución fisiológica, a 37 ºC. Se aplicaron los Métodos de Polibrene y Azul Alcian y se implementó una Titulación de la Agregación a partir del Polibrene. Se definieron coeficientes para cada método que fueron analizados estadísticamente. Los resultados mostraron que a mayor tiempo de tratamiento y a mayor concentración larvaria, aumentó la captación de ácido siálico (AS) disminuyendo la agregación de GR y GRb. El efecto fue mayor en la incubación del parásito con GRb en relación de GR. El tratamiento enzimático redujo la carga porcentual en los glóbulos incubados con ambos [CLAL] de forma similar (16%-17% de la inicial) y la Diferencia de Carga de GR y GRb debida a ambos fue aproximadamente del 10% indicando que la pérdida de carga producida por [CLAL]1 fue significativa con respecto a [CLAL]2. Se concluye que A. lumbricoides puede captar AS eritrocitario. Este fenómeno contribuiría a explicar la anemia y trombos producidos en ascariosis, destacando que en pacientes con patologías que cursen con déficit de AS estas complicaciones serían más relevantes.

The aim of this work was to study the A. lumbricoides' effect on the anionic charge of erythrocytes and desyalated erythrocytes. Work was carried out on 30 extracts ([AE]) and 2 larval concentrates ([ALLC] 1: 500-600; ([ALLC] 2: 200-300 larvae/ mL) of the parasite and Group O erythrocytes in saline (RC) and enzymatic medium (RCb). The red cell sediment was incubated with an equal volume of parasite and the Control (RCc) with saline solution, at 37C. Polybrene and Alcian Blue Methods were applied and Aggregation Titulation from Polybrene was implemented. The coefficients for each method were defined,which were analyzed statistically. The results showed that a longer treatment and also at higher larval concentration,increased the capture of sialic acid (AS),while decreasing the RC and RCb aggregation. The effect was greater on the incubation of the parasite with RCb in relation to RC. The enzymatic treatment reduced similarly the percentage charge in the globules incubated with both [ALLC] (16% -17% of initial) and the variation of RC and RCb charge due to both was about 10%,indicating that the charge loss caused by [ALLC]1 was significant with regard to [ALLC]2. We concluded that A. lumbricoides can capture erythroctyte SA. This phenomenon would contribute to explain the anaemia and thrombi produced in ascariosis,noting that in patients with AS deficit pathologies,these complications would be more relevant.

O objetivo foi estudar o efeito de A. lumbricoides sobre a carga aniônica de eritrócitos e eritrócitos desializados. Trabalhou-se com 30 extratos ([EA]) e 2 concentrados larvais parasitários ([CLAL]1: 500- 600/ [CLAL]2: 200- 300 larvas/ mL) e eritrócitos Grupo "O" em meio salino (GV) e enzimático (GVb). Foi incubado o sedimento globular com igual volume de parasita e o Testemunha (GVc) com solução fisiológica,a 37ºC. Foram aplicados os Métodos de Polybrene e Azul Alciano e se implementou uma Titulação da Agregação a partir do Polybrene. Definiram-se coeficientes para cada método que foram analisados estatisticamente. Os resultados mostraram que a maior tempo de tratamento e a maior concentração larvária,aumentou a captação de ácido siálico (AS) diminuindo a agregação de GV e GVb. O efeito foi maior na incubação da parasita com GVb em relação de GV. O tratamento enzimático reduziu a carga percentual nos glóbulos incubados com ambos [CLAL] de forma similar (16%-17% da inicial) e a Diferença de Carga de GV e GVb devida a ambos foi aproximadamente de 10% indicando que a perda de carga produzida por [CLAL]1 foi significativa com relação a [CLAL]2. A conclusão é que A. lumbricoides pode captar AS eritrocitário. Este fenômeno contribuiria a explicar a anemia e trombos produzidos em ascaridíase,destacando que em pacientes com patologias que cursem com déficit de AS estas complicações seriam mais relevantes.

Alteración de la carga eritrocitaria utilizando el método de azul Alcian en extractos de Ascaris lumbricoides / Change of erythrocyte charge with the use of Alcian blue method in Ascaris lumbricoides extracts

Introducción: el estudio de las interacciones hospedador-parásito es un nuevo desafío para comprender aspectos del metabolismo parasitario, los mecanismos de invasión, escape inmunológico y daño. Ascaris lumbricoides puede provocar anemia y trombosis. Previamente se demostró que este parásito altera la carga superficial eritrocitaria, lo cual indica que puede captar ácido siálico del glóbulo rojo. Objetivo: estudiar el efecto producido por extractos del parásito adulto sobre la carga eritrocitaria, utilizando el método de azul Alcian y comparar su sensibilidad con el método de Polibrene. Métodos: se trabajó con 55 extractos parasitarios [EA] y con suspensiones de eritrocitos grupo O. Se realizó el tratamiento de los glóbulos incubando el sedimento con igual volumen de [EA] a 37 ºC durante 1 h. El Control (eritrocitos sin contacto con [EA]) fue incubado con tampón fosfato pH 7,4. Se aplicó el método de azul Alcian y se determinó la carga aniónica eritrocitaria porcentual (CAE por ciento) en el Control y en los glóbulos tratados. Se definió el coeficiente experimental de carga aniónica eritrocitaria (Cexp CAE), como el cociente entre CAE por ciento final e inicial. Resultados: se observó que 27 de los 55 [EA] (49,1 por ciento) modificaron la carga de los glóbulos rojos, el Cexp CAE para estos eritrocitos resultó 0,75 ± 0,1144 y para los que no mostraron variación de carga de 0,94 ± 0,04450. El análisis estadístico concluyó que los métodos de Polibrene y de azul Alcian tienen sensibilidades comparables (p> 0,20). Conclusiones: Ascaris lumbricoides es capaz de captar ácido siálico del eritrocito, lo que contribuiría a explicar la trombosis atribuida al parásito, pero también sugeriría que el nematodo lo podría utilizar en sus rutas metabólicas o en sus estrategias de evasión inmunológica.

Introduction: the study of the host-parasite interactions is a new challenge to understanding some aspects of the parasitic metabolism and the mechanisms of invasion, immunological evasion and damage. Ascaris lumbricoides may cause anemia and thrombosis. It was previously shown that Ascaris lumbricoides modified the superficial charge of erythrocytes, which means that the parasite can capture sialic acid from the red blood cell. Objective: to study the effect of adult parasite extracts on the erythrocyte charge using the Alcian Blue method and to compare its sensitivity with the Polybrene method. Methods: fifty five adult parasite extracts and Group O erythrocyte suspensions were used. The erythrocytes were treated by incubating the sediment with an equal volume of parasite extracts for one hour at 37 ºC. The control group (erythrocytes without any contact with the parasite extracts) was incubated with pH 7.4phosphate buffer solution. Alcian Blue method was applied and the percentage erythrocyte anionic charge was determined in the control group and in the treated red cells. The experimental coefficient of erythrocyte anionic charge was defined as the quotient between the initial and the final percentage erythrocyte anionic charge. Results: it was shown that 27 out of 55 parasite extracts (49.1 percent) modified the charge of the red blood cells, being their experimental coefficient of the erythrocyte anionic charge 0.75 ± 0.1144 whereas the same coefficient amounted to 0,94 ± 0.0445 for those which did not show any charge variation. The statistical analysis concluded that the Polybrene and Alcian Blue Methods had comparable sensitivities (p>0.20). Conclusions: A. lumbricoides is able to capture sialic acid from the erythrocyte, which would not only explain the thrombosis attributed to the parasite, but also suggest that the nematode could use this acid either in its metabolic routes or for its strategies of immunological evasion.

Alelos HLA-DRB1 en pacientes infectados con patógenos intracelulares en Rosario, Santa Fe / HLA-DRB1 alleles in patients infected with intracellular pathogens in Rosario, Santa Fe

En el desarrollo de la respuesta inmune a patógenos intracelulares participa el elevado polimorfismo de las moléculas HLA de clase II. El objetivo de este trabajo fue establecer la participación de los alelos HLA-DRB1 en personas con infección con Trypanosoma cruzi (T. cruzi) o con Mycobacterium leprae (M. leprae). Se estudiaron 252 individuos de la ciudad de Rosario, divididos en: 86 personas seropositivas para T cruzi (sin compromiso cardiológico de relevancia), 85 pacientes con diagnóstico de Lepra y 81 individuos controles, sin evidencia de patologías. El ADN genómico fue extraído de sangre periférica utilizando el método de salting out y empleado como templado para amplificar por PCR el segundo exón polimórfico de HLA-DRB1. Los alelos fueron tipificados mediante la técnica de PCR­-SSOP. La comparación de frecuencias mostró prevalencia de los alelos DRB1 *0409 y DRB1 *1503 en los individuos seropositivos para T. cruzi con respecto al grupo control. Por otra parte, el análisis estadístico indicó una disminución significativa del alelo DRB1 *1103 en pacientes con esta tripanosomiasis. Al examinar las frecuencias observamos en el grupo de pacientes con Lepra un aumento significativo de los alelos DRB1 *1401 y DRB1 *1406. Además observamos que las proporciones de los alelos DRB1 *0808 y DRB1 *1103 en los enfermos son significativamente inferiores con respecto al grupo control. Los alelos HLA DRB1 podrían actuar solos o en combinación con otros genes para conferir susceptibilidad o resistencia a estas infecciones en la población de Rosario, Argentina.

In the development of the immune response to intracellular pathogens implicated the high polymorphism of HLA class II molecules. The aim of this study was to establish the involvement of the HLA-DRB1 alleles in infected subjects with T. cruzi or leprosy patients in Rosario, Argentina. We studied 252 individuals who divided into: 86 positive people for T. cruzi without cardiac damage, 85 patients diagnosed with leprosy and controls 81 individuals without evidence of disease. Genomic DNA was extracted from peripheral blood using the standard salting out method and used as a template to amplify by the PCR the polymorphic second exon of the HLA­-DRB1. PCR products were hybridized separately with sequence-specifics oligonucleotides (SSOP). Statistical analysis indicated that of increased frequencies of DRB1 *0409, and DRB1 *1503 in individuals with Chagas' disease. DRB1 *1103 allele was prevalence in the group control and could be associated with resistance to the presence of trypanosomiasis. DRB1 *1401 and DRB1 *1406 alleles were significantly more prevalent in leprosy patients, whereas a decreased frequency of DRB1 *0808 and DRB1 *1103 alleles was found, by comparison with the group control. The HLA-DRB1 alleles could act alone or in combination with other genes to confer differential susceptibility and also protection to these diseases in Rosario, Argentina.

Estudio de las variantes alélicas del gen FUT2 en una población de Rosario, Santa Fe / Allele of FUT2 gen variables in a population of Rosario, Argentina

El estado secretor de un individuo está determinado por el gen Secretor (FUT2), responsable de la presencia de antígenos ABH en las secreciones del organismo. El polimorfismo del gen FUT2 muestra una gran variabilidad dependiente del tipo de población. Alrededor del 20% de los individuos caucásicos son no­secretores y presentan la mutación G428A. El objetivo de este trabajo fue estudiar las variables alélicas del gen FUT2 en una población de Rosario. Se trabajó con muestras de sangre periférica de dadores voluntarios (n=1728). Se determinó el estado secretor en plasma y saliva y el fenotipo Lewis. El ADN genómico fue extraído por la técnica de salting-out modificada y fue analizado por ASA-PCR con cebadores específicos para el alelo G428A y para el alelo wild type del gen FUT2. Los resultados obtenidos mostraron que el 77% de los individuos investigados fueron secretores y presentaron el fenotipo Lewis Le(a-b+). El polimorfismo G428A estuvo presente en homocigosis en un 7.5%, valor menor al reportado en la bibliografía para la población caucásica. El análisis molecular del gen FUT2 confirmaría la diversidad genética de la población investigada y podría ser utilizada como un marcador poblacional.

The secretor status is determinate by the secretor gene (FUT2) responsible of the ABH antigens expression in human secretions. About 20% of Caucasian individuals are non-secretors. The aim of this study was to study the allelic varieties of the FUT2 gene by a PCR reaction. We worked with peripheral blood samples of volunteers (n= 1728). We determinated the secretor status in plasma and saliva. The genomic DNA was extracted by an enzymatic digestion method and was analyzed by ASA-PCR with specific primers for the G428A allele and for the wild type allele of the FUT2 gene. The results obtained by serologic and molecular methods showed that the 77% of the investigate individuals were secretors. The G428A polymorphism had present in a 7.5%. The allelic varieties of the other non-secretor individuals different to the G428A might to correspond to other mutations. The molecular analysis of the FUT2 gene confirms the genetic diversity of the investigated population.

Pérdida de la expresión antigénica ABH en pacientes con lesiones orales precancerosas y cancerosas / Loss of ABH antigenic expression in patients with precancerous and cancerous oral lesions

Los antígenos ABH, productos de la interacción de 2 sistemas genéticos, Hh y ABO, están sujetos a leyes de herencia y pueden estar localizados no sólo en los eritrocitos, sino también en la mayoría de las células humanas. El objetivo del este trabajo fue investigar la expresión de antígenos ABH en pacientes con lesiones orales premalignas y malignas orales. Se trabajó con muestras incluidas en tacos de parafina de pacientes con lesiones orales (n= 57). Los pacientes fueron clasificados en 2 grupos: a) lesiones premalignas y malignas diagnosticadas clínica y anatopatológicamente y b) lesiones benignas (n=93). Se investigaron los antígenos ABH por la técnica de inmunoadherencia específica modificada. Se utilizó la adherencia al tejido vascular como control positivo y al tejido adiposo como control negativo. Los resultados fueron semicuantificados desde adherencia fuertemente positiva a negativa. Se observó una significativa relación entre la expresión antigénica ABH y el grado de malignidad de las lesiones analizadas (P Yates= 0,005). La pérdida de reactividad ABH en los sitios de mayor invasividad tumoral se correlaciona con el grado del desarrollo del tumor, el grado histológico y su malignidad.

The ABH antigens, which are produced by the interaction of 2 genetic systems, Hh and ABO, are subjected to laws of heredity and may be located not only in the erythrocytes, but also in most of the human cells. The objective of this paper was to investigate the expression of ABH antigens in patients with premalignant and malignant oral lesions. Work was done with samples included in paraffin plugs in patients with oral lesions (n= 57). The patients were classified into 2 groups: a) clinical and anatomopathologically diagnosed premalignant and malignant lesions, and b) benign lesions (n=93). The ABH antigens were investigated by the modified specific immunoadherence technique. Adherence to the vascular tissue was used as a positive control, whereas adherence to the fat tissue was considered as a negative control. The results were semiquantified from strongly positive to negative adherence. A significant relation between the ABH antigen expression and the degree of malignancy of the analyzed lesions (P Yates= 0.005) was observed. The loss of ABH reactivity in the sites of greater tumoral invasiveness is correlated with the tumor development degree, the histological degree and its malignancy.

Expresión antigénica ABH y carácter secretor en pacientes con lesiones orales precancerosas y cancerosas / Secretor status and ABH antigens expression in patients with oral lesion

Los antígenos ABH, productos de la interacción de dos sistemas genéticos Hh y ABO, están sujetos a leyes de herencia y pueden estar localizados no sólo en los eritrocitos sino también en la mayoría de las células humanas. El objetivo del este trabajo fue investigar la relación entre el carácter secretor de pacientes con lesiones orales pre-malignas y malignas y la expresión antigénica ABH en cortes histológicos de dichas lesiones. Se trabajó con muestras incluídas en tacos de parafina de pacientes con lesiones orales. Los pacientes fueron clasificados en 2 grupos a) lesiones pre-malignas y malignas y b) lesiones benignas. Se investigaron los antígenos ABH por la técnica de inmunoadherencia específica modificada. Se utilizó la adherencia al tejido vascular como control positivo y al tejido adiposo como control negativo. Los resultados fueron semicuantificados desde adherencia fuertemente positiva a negativa. El carácter secretor fue determinado por la técnica de inhibición de la hemaglutinación. En 21 de las 34 muestras se observó una débil expresión antigénica en áreas atípicas, y deleción total en las áreas histológicamente afectadas por neoplasia. En 8 muestras hubo pérdida total de los antígenos ABH tanto en áreas normales como patológicas, estos pacientes presentaron un mayor grado de malignidad y metástasis que aquellos que conservaron la antigenicidad. Los pacientes con lesiones orales pre-malignas y malignas presentaron un incremento del carácter no secretor (52,3 por ciento) respecto de la población control (19,5 por ciento) y de aquellos pacientes con lesiones orales benignas (15.4 por ciento). Se observó una importante asociación entre pacientes no secretores y deleción de los antigenos ABH en muestras de lesiones orales. Además, hemos encontrado, en el grupo no secretor, una mayor malignidad de las lesiones orales como así también una mayor presentación de displasia epitelial. El estudio del carácter secretor en los pacientes con lesiones orales...

Aloinmunizacion a un antigeno del sistema rh de alta frecuencia / Alloimmunization to a high frequency Rh antigen

Describimos el caso de una embarazada sensibilizada con un aloanticuerpo anti-Rh17 de muy amplia reactividad. Los glóbulos rojos de la paciente presentaban una deleción parcial de los antígenos del sistema Rh, responsable de la aloinmunización encontrada. Debido a la dificultad de obtener sangre compatible se elaboró un plan de transfusión autóloga para cubrir las posibles demandas. El análisis molecular del locus RH demostró la presencia de un alelo híbrido RHCE-D(5-7)-CE que generaba el fenotipo delecionado.

Determinación de IgG en eritrocitos senescentes por un ensayo enzimático con consumo de antiglobulina / Determination of senescent red blood cells bound IgG using an enzyme test based an the consuption of antiglobulin

Durante el envejecimiento de los GR se acumula IgG autóloga sobre la membrana eritrocitaria. Esta IgG esta dirigida a un neo antígeno de senescencia, ubicado en la proteína banda 3. El objetivo de este trabajo fue determinar pequeñas cantidades de IgG en la membrana del GR utilizando un inmunoensayo con antiglobulina conjugada con una enzima. Las suspensiones de GRSe y GRJ fueron incubadas con anti-IgG humana conjugada con fosfatasa alcalina. Se transfirieron alícuotas a microplacas sensibilizadas con IgG humana. Se agregó el sustrato de la enzima y se midió la IgG libre. Las concentraciones de IgG unida a la membrana eritrocitaria en GRSe (13.31 x 10-4(g/(L(1.57 x 10-4) fueron significativamente mayores (p(0.0001) que los valores observados en GR (3.35 x 10-4(g/(L(1.39 x 10-4). Los resultados obtenidos indican que esta metodología constituye una herramienta útil para determinar pequeñas contidades de IgG unida a la membrana eritrocitaria.

Enfermedad hemolítica fetoneonatal: estudio prenatal del genotipo RHD / Feto-neonatal hemolytic disease: prenatal study of RHD genotype

El objetivo de este trabajo fue determinar la presencia del gen RHD en células fetales obtenidas de líquido amniótico por PCR. Se estudiaron 65 muestras de líquido amniótico, 11 de madres RhD negativas sensibilizadas con anti-D. Se confirmó el origen fetal del ADN analizando un locus VNTR y 3 loci STR en las muestras de ADN de líquido amniótico y sangre materna. En las muestras no contaminadas (n = 62) se realizó la genotipificación RHD utilizando una estrategia de PCR multiplex que permite la obtención de tres productos de amplificación en los fenotipos RhD positivos y sólo un fragmento de ADN en los fenotipos RhD negativos. Se genotipificaron 54 fetos RhD positivos (8 de madres RhD negativas sensibilizadas) y 8 fetos RhD negativos (3 de madres RhD negativas sensibilizadas). La genotipificación del ADN fetal permite diagnosticar con una única amniocentesis fetos en riesgo real de enfermedad hemolítica fetoneonatal y evitar la utilización de métodos invasivos en casos de fetos RhD negativos.

Hemorreología comparativa: estudios en diabéticos e hipertensos / Comparative hemorheological: study on diabetics and hypertensive patients

La medición de viscosidad plasmática y de sangre entera, determinadas en un viscosímetro rotacional, fue utilizada para verificar la existencia de anormalidaes hemorreológicas en pacientes diabéticos e hipertensos. Dichas mediciones se realizaron a distintas velocidades de corte, con lo cual se trazaron los correspondientes reogramas. Con esos datos se calcularon las correspondientes viscosidades relativas. Los resultados obtenidos, comparados con valores de los mismos parámetros obtenidos en individuos normales, permitiernon detectar comportamientos anormales, característicos de esas patologías circulatorias. Las diferencias más significativas se obtuvieron a una velocidad de corte de 5,76 seg. Se concluye que, en los pacientes diabéticos, los factores plasmáticos tienen mayor influencia en la aparición de hiperviscosidad, mientras que en los pacientes hipertensos son más influyentes los factores globulares

Erythrophagocytosis assay in patients with autoimmune hemolytic anemia

The aim of this paper is to evaluate the erythrophagocytosis assay (EA) in patients with autoimmune hemolytic anemia (AIHA). Direct antiglobulin test (DAT), indirect antiglobulin test (ITA) and EA were performed in blood samples from 46 patients with presumed AIHA. The EA was carried out incubating patients'erythocytes and peripheral blood monocyte. A total of 200 monocytes were analysed to determine the percentage of active phagocytic cells (porcentage APC). In 9 of these patients the applied treatment was evaluated by DAT,IAT and EA. In 14 transfusion requirements, the compatibility tets and EA were performed. For EA, patients'monocyte were incubated with erytrocytes from previously selected units sensitized with patients'sera. The porcentage of APC was 32.1 +/- 1.7 in 35 patients with positive DAT and 17.8 +/- 1.3 in 11 patients with negative DAT. This last value was significantly higher than that with negative controls (3.7 +/- 0.3) (p

Aplicaciones clínicas de la prueba funcional de eritrofagocitosis / Functional test of erythrophagocytosis : clinical aplications

Debido a la multitud de factores humorales y celulares que intervienen en la destrucción eritrocitaria, es difícil correlacionar la alteración in vivo con las pruebas in vitro. Hemos desarrollado el ensayo de eritrofagocitosis para ser utilizado como parámetro evaluador de los fenómenos que ocurren in vivo. Esta pruba estudia la capacidad de adherencia y fagocitosis de los monocitos de sangre periférica para hematíes sensibilizados. Se ha demostrado su utilidad en el diagnóstico de AHAI por anticuerpos calientes, fundamentalmente en pacientes que presentan la prueba de la antiglobulina directa sistemáticamente negativa. También permitió realizar el seguimiento y respuesta al tratamiento de estos pacientes, que presentaron prueba de Coombs directa e indirecta positiva, independientemente del número de moléculas de IgG presente por GR. Los porcentajes de CFA obtenidos mediante la prueba de eritrofagocitosis fueron variando de acuerdo con el tratamiento aplicado, indicando una modificación en los niveles de IgG presente en los hematíes. Este ensayo funcional fue aplicado también en el estudio de aloanticuerpos. La EHFN resulta a menudo difícil de predecir por pruebas serológicas de rutina, debiendo recurrirse a métodos invasivos. Hemos aplicado la prueba de monocapa de monocitos, reflejando una mejor correlación con el estado clínico del bebé que las pruebas serológicas realizadas. En Medicina Transfusional es de importancia determinar el significado clínico de los anticuerpos que presentan reactividad contra antígenos de muy alta frecuencia. El ensayo de monocapa de monocitos fue realizado en pacientes con requerimiento transfusional que presentaron pruebas pretransfusionales positivas. Se transfundieron las unidades de sangre con menor porcentaje de CFA. Este ensayo celular presenta una mejor correlación de la hemólisis desarrollada in vivo, pudiendo ser aplicado cuando no se disponga de sangre compatible.

Prueba de compatibilidad inmunogenética / Immunogenetic compatibility test

En este trabajo presentamos nuestra experiencia en la utilización de la prueba de compatibilidad inmunogenética para establecer vínculos biológicos en tríos típicos. En la década del 70 nuestro Servicio utilizaba únicamente los sistemas eritrocitarios que nos permitían excluir solamente el 20 por ciento de los hombres falsamente alegados como padres. Posteriormente incorporamos al estudio de los antígenos del sistema HLA, que posibilitó la inclusión del padre alegado como biológico, con probabilidades de paternidad comprendidas entre el 90 al 98 por ciento, según la frecuencia poblacional del halotipo HLA obligado. El desarrollo de las técnicas de biología molecular ha permitido incorporar a las pericias realizadas en nuestro laboratorio el análisis del polimorfismo del ADN. Proponemos que la prueba de compatibilidad inmunogenética comprenda el estudio de marcadores fenotípicos (antígenos de los sistemas eritrocitarios y del sistema HLA) y genotípicos (polimorfismo del ADN). La utilización de esta metodología permite la inclusión de la paternidad con una confiabilidad de los resultados superior al 99,99 por ciento.